gfp激发波长和发射波长_gfp的激发和发射波长

请问转基因植物的GFP发光检测能用凝胶成像系统的紫外灯直接观察么？

蓝光轮换板强度不够，最用使用蓝光透射台或是反射蓝光灯。需要结合对应波长的滤镜使用，赛智有相关产品。

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gfp激发波长和发射波长_gfp的激发和发射波长

建议用激光共聚焦显微镜（confocal）观察。紫外灯你能设定它的激发光波长么？

GFP吸收的光谱,峰值为395nm(紫● GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性；外),并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光);发射光谱峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder).

而常规情况下，凝胶成像厂家标配的是302nm紫外，极少会有254nm和360nm，因此检测效果不是很好的。的凝胶成● 抗Flag的抗体可有效识别Flag标签，这样就方便通过 Western blot、ELSA等方法对含有Flag的融合蛋白进行检测、鉴定；像解决是Syngene的凝胶成像配了一个蓝光转换板和SG滤光片，能在副峰很好的检测到，你找有这个厂家和配置的凝胶成像试下，反正我在一个实验室见过一个老师在这样用，采集的非常漂亮的

GFP是绿色萤光蛋白，RFP是红色萤光蛋白，可是网上搜索不到RFP的资料，谁能帮帮我，解释一下RFP的内容？

②在大肠杆菌中大量表达甲基绿—派洛宁（myl green-pyronin）为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色）。即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。，起到提高表达量的作用。

标签抗体的主要类别

● 融合有Flag标签的目的蛋白，可以直接通过Flag进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高；

融合标签，如Flag、GST等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可Flag标签是由八个亲水氨基酸构成的一段寡肽，序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可用于蛋白纯化及检测。溶性和稳定性等。常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白。

荧光显微镜怎么看绿色荧光

● 研究表明GFP融合蛋白可以通过铜离子或锌离子固相化金属层析柱纯化；

1材料准备：1）含有GFP荧光蛋白受体；2）激发光源SLF6300，光源专用调光器，滤光片，滤光片适配器，观察片，荧光增强，转接环（滤光片与观察片是过滤多余的杂光，转接环是连接滤片）；3）尽量降低环境光

c-myc标签

2荧光观测：以下以SLF6300荧光蛋白激发光源为例

1）将滤镜安装在转接环上；

2）将转接环安装在显微镜上；

4）将需要观测的样本放在显微镜下；

5）接通激发光源并将亮度调整到进行激发测试；

6）等待激发；

7）激发完成并进行拍摄

显示细胞内DNA的原理和方法？

作用机理理论是可行的，但是由于转基因后不一定在所有组织者，所有细胞，均有高峰度表达式，所以实际上你是观察不到的。得用荧光显微镜

如何选择酶标仪

其用途主要是蛋白和定量，酶活测定，荧光免疫分析，代谢物/被分析物定量，胞内钙离子浓度的变化，荧光蛋白的基因分析 (GFP)，细胞存活/毒性/增殖/粘合分析，受体-配基结合，蛋白-DNA相互作用，寡核苷酸多态性，酶活性分析，物筛选等方面。

荧光酶标仪(Fluorence microplate reader)是用来进行荧光检测的酶标仪。通过激发光栅分光后的特定波长的光照射到被荧光物质标定的样品上，会发出波长更长的发射光，通过发射光栅后到达检测器，荧光的强度与样品的浓度呈一定的比例。荧光检测灵敏度高，可实时检测，使用方便，检测模式多样，但是容易受外界干扰，激发光与发射光容易互相影响干扰检测。

3）将观察片安装在显微镜上；

荧光酶标仪最常见的品牌是的是美国宝特(BioTek)。BioTek 有多种荧光检测仪器，从低成本、高精度的 FLx800?? 到模块化的 Synergy?? 2 和 Synergy?? 4，可满足各种荧光检测需求。

FLx800 系列有五种不同型号的荧光酶标仪。分别是FLX800T，FLX800TB，FLX800TBP，FLX800TBI，FLX800TBID。其别在于探针的位置顶部/底部，以及是否配有孵育，震荡，注射器，PCR读板等。

带gfp标签的蛋白能不能用来做ip

EGP绿荧光蛋白(GreenFluorescentPortein，GFP)它的27kDa的单体由238个氨基酸构成，本身就是一个生物发光系统，附带有激发后能发射生物荧光的发光色基，其发光过程不同于其它生物发光组织，是不需荧光素酶参与的。光激发GFP荧光是一个特异性的过程，并不需要任何的协同因子、底物或其它来自于水母的基因表达产物。当能量由Ca2+-激活光蛋白(Aequorin)传给GFP时引发荧光(Wardetal。，1980)。野生型GFP(wtGFP)的克隆及其在异源系统中等表达使其成为一种新的遗传标记系统(prasheretal.,1992;Inouye&Tsuji,1994a;Wang&Hazelrigg，1994)。当GFP在原核或真核细胞中表达并受到蓝光或紫外光辐照时就可发出亮绿色荧光。GFP色基GFP色基是由丝氨酸酪氨酸甘氨酸(SerTyrGly)形成的环化三肽所构成，并且只有色基包被在完整的GFP蛋白中才能发出荧光(Codyetal.,1993)，被切断的GFP(即使是C末端的少数几个氨基酸)亦能导致GFP失去发光能力。GFP和GFPS65T的晶体结构研究表明色基紧密地包被在由α折叠围成的β盒中(Ormetal.,1996;Yangetal.,1996)。这一结构提供了色基发射荧光的微环境，该环境排除了基质及氧对色基发光的影响。只具备一级结构GFP是不能发光的，功能基的形成是在转录翻译后，并经历一个环化反应和一个需分子氧的氧化步骤。色基高级结构的形成可能是荧光蛋白形成的限速步骤，特别是分子氧受到限制时(Heimetal.,1994;Disetal.,1995)。wtGFP吸收紫外和蓝光，其吸收峰为λmax＝395nm和λmin＝470nm，发射峰为λ＝509nm。EGFP是GFP突变系(1)RedShifted(红偏移)GFP突变系(EGFP&GFPS65T)色基发生了氨基酸取代，λmax(Excitation)偏移至490nm附近。红偏移突变系的激发峰都落● 序列短小，只用条人工合成的寡核苷酸链就可以编码；在常用滤色片的波长范围内，所以获得的荧光信号要比wtGFP明亮得多。同样，FACS和共焦显微镜的氩离子光源的发射波长为488nm，对RedShifted突变系的激发效率也明显高于wtGFP。EGFP发生了双氨基酸取代，Leu(亮氨酸)取代Phe64(苯丙氨酸)，Thr(苏氨酸)取代Ser65(丝氨酸)(Cormacketal.,1996)。基于等量溶解蛋白的光谱分析，由于Em(消光系数)的增加和色基构型的高效率，EGFP在488nm处激发后灯荧光强度为wtGFP的35倍(Cormacketal.,1996;Yangetal.,1996)。在相同条件下(489nm)测得EGFP得Em为53，000cm-1M-1，而wtGFP为9，500CM-1M-1，GFPS65T为55，000cm-1M-1(Pattersonetal.,1997)。EGFP的色基构型在37℃比wtGFP或GFPS65T发光效率更高，在这一温度下表达的EGFP可溶性蛋白95%为有效色基(Pattersonetal.,1997)。GFPS65T红色荧光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)基因是从海葵Discoso-masp中分离出的一种新的荧光蛋白基因，其蛋白质的吸收光谱为583 nm，不需要任何预处理便可检测到[。红色荧光蛋白因其红荧光较强的组织穿透力，已被广泛用于动物、植物和酵母等真核细胞内基因表达的报告基因。为Thr取代Ser65的突变体(Heimetal.,1995)，同样条件下，它的荧光强度强于wtGFP4～6倍，并且其的Redshifted激发峰位于490nm，但37℃时色基形成的效率不如EGFP。你可以两个都试试，应该都没有问题的上边的我也是看了这个网址后给你发的，我感觉挺好的，还有不明白的，你自己看看吧，那里还有很多东西我没给你拷过来/periodical/periodical.articles/jgswxb/jgsw99/jgsw9903/990315.htm

内参抗体和标签抗体有哪些

● GST融合蛋白已经成为分子生物学领域的基本工具，其广泛用于研究蛋白质-DNA及蛋白质-蛋白质间的相互作用，也可作为抗原用于免疫学或的研究。

标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

亲和性标签

亲和标签大都有特异性的配基，利用这些配基可以方便的用亲和层析的方法对融合蛋白进行分离和纯化。

共同特点：

● 纯化方便，一般通过一步纯化就可以获得纯度和质量比较好的融合蛋白；

● 标签对目的蛋白的三维结构或是生物学活性影响很小；

● 标签易于切除；

● 纯化过程中可以对目的蛋白进行简单而的测量；

● 适用于大量不同蛋白质的表达。

Flag标签

★ 可sigma的flag抗体（F1804），用的效果一直很稳定，值得！

● Flag序列的第二个氨基酸是酪氨酸(Tyr)，属于芳香族氨基酸，是抗原-抗体特异性反应的主要因素；

● 位于N端带负电的天冬氨酸(Asp)可辅助酪氨酸的抗原性；

优点

● 结晶条件时Flag融合蛋白的构象与单纯目的蛋白的构象几乎完全相同，通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的性质和功能，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究；

● Flag融合标签含有一个肠激酶切割位点，肠激酶可以识别该短肽C端的五个氨基酸( Asp-Asp- Asp-Asp-Lys)，通过肠激酶处理除去标签后即可获得天然的非融合蛋白质。

Flag标签抗体可以应用于检测和Flag标签融合蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化或定量检测Flag融合表达蛋白等。

His标签

His-tag由人工合成的组氨酸首尾相连构成，通常由6个氨基酸（HHHHHH）组成，也有3个和8个的情况。另外，也存在一种由19个组氨酸构成的天然多聚组氨酸标签（HAT-tag)。

★ 可南京铭研生物的his抗体（MY1901）,申领的免费试用后结果挺不错的，价格也比较便宜，挺不错的品牌！

● 多种宿主细胞已被证实可用于His融合标化重组蛋白，包括:细菌、酵母、哺乳动物细胞、杆状感染的昆虫细胞；

● His标签能在变性条件下纯化蛋白，故己经聚集成包涵体的蛋白可溶解在适当的溶剂中(如:尿素、盐酸胍)；

● His融合标签可以很容易通过PCR技术，利用聚合酶与目的基因连接在一起。一般情况下将His融合标签添加在重组蛋白质的N端或C端，但添加在哪端需根据实际情况，添加位置是针对特定蛋白而言的；

不能用此法纯化的情况： ①由于金属离子可被吸附到次氮基三醋酸(NTA)树脂，带金属离子中心的蛋白质不可纯化；

②由于N2NTA可被还原，在厌氧条件下也不要使用该办法。

优点

● 分子量小，只有约0.84KD，一般不影响目标蛋白的功能；

● 既可纯化疏水性强的蛋白(非离子型表面活性剂存在的条件下)，也可纯化包涵体蛋白(变性条件下)；

● 可被用于蛋白质蛋白质、蛋白质DNA相互作用研究:可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；

● 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。

HA标签

HA融合蛋白也是一种小肽，由9个氨基酸组成( YPYDVPDYA)，其来源于流感的红细胞凝集素表面抗原决定簇。对外源目的蛋白的空间结构影响较小，容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用抗HA抗体检测和ELSA检测。

C-myc标签即人原癌基因产物myc蛋白表位，是一个由11个氨基酸残基构成的小标签，其序列为 GIu-GIn-Lys-eu- le-Ser-Glu-Glu-ALeu。这11个氨基酸作为抗原表位在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。其对应单抗既可用于C-myc融合蛋白的免疫印迹和免疫沉淀，还可用于流式细胞术分析。C-myc标签也已广泛用于在酵母、细菌、昆虫及哺乳动物等表达体系中重组蛋白的检测和鉴定。

GST标签

● 应用于原核表达：

①作为一种高度可溶的例如，肌球蛋白作为内参不适合做肌肉样品的内参。蛋白，能增加外源蛋白的可溶性；

● GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂（如：盐酸胍或尿素等）；

非亲和标签

非亲和标签的作用不是用来纯化重组蛋白，而是用于检测重组蛋白的表达、分布，帮助重组蛋白正确折叠以及保护融合蛋白免受宿主细胞降解等。

绿色荧光蛋白( green fluorescent protein，GFP)

GFP是发光生物体内广泛存在的一类蛋白质，不需要激发即可发出一定波长的荧光，因此被广泛用于蛋白质在活细胞体内的空间定位、运动变化等的研究。

● 抗GFP的抗体也被用于GFP融合蛋白的检测，在GFP的荧光能力被破坏的情况下(如SDS-PAGE)

类型多种多样，要结合自己实验样品的特点进行选择。

例如，研究的目标分子带有GST标签，不能用His标签抗体做检测，等等。

什么东西在高倍显微镜下能看见？ 什么东西只能在电子显微镜下能看见/ 请详答

GST即谷胱甘肽-S-转移酶，具有解毒作用，可将谷胱甘肽中的硫基转移至含硝基或卤化物的复合物中。其天然大小为26KD。

光学显微镜放大倍率为几倍到1000倍左右，电子显微镜通常在几倍到几万倍甚至几十万倍，所以太小的东西光学显微镜是看不到的，只能用电子显微镜，如纳米级别的颗粒

显微镜按成像原理分光学显微镜及电子显微镜，光学显微镜是通过数组镜片组成的目镜物镜按照光的折射反射原理所设计的，而电子显微镜是用电子束使样品成像的显微镜，光学显微镜的放大倍数一般为几倍十几倍、几拾倍到贰叁仟倍，分辨率理论上是3微米以上，实际上1个微米的免强是能看到的，而电子显微镜的放大倍率一般为几万倍到几拾万倍，所以能分绿光荧光蛋白被激发后发出绿色荧光，显微镜观测并拍摄GFP绿光荧光蛋白激发步骤如下：辨出更加微小的事物，可以观察到原子、分子等。

细菌在高倍镜下能看见；细胞膜在电子显微镜下能看见

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein)简称GFP，这种蛋白质最早是从一种水母中发现的。GFP在蓝光波长

D本题主要考查蛋白质、氨基酸等知识。蛋白质中不可能含有稀有气体元素(Ne)，A错；向蛋白质中滴加AgNO 3 溶液会使蛋白质变性，再加蒸馏水蛋白质不能重新溶解，B错；蛋白质是氨基酸通● 虽然多聚组氨酸融合标签因为分子量小且带电荷而几乎不影响蛋白质的活● 靠近C端的六个氨基酸( Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成一个亲水序列，可能形成高度暴露的三位蛋白质构型在理论上可使序列达到的亲水性，大大增强了Flag融合标签的抗原性。性，但是通常不能完全排除亲和标签影响其蛋白质活性的可能，因此一般会选择在变形条件下进行蛋白纯化来避免这种现象的发生。过缩聚反应得到的，C错。