共聚焦荧光显微镜 共聚焦荧光显微镜放大倍数

激光共聚焦显微镜对载体表面荧光标记蛋白质能定量吗？

激光

坦入射角和圆锥角的改变对滤光片的光谱曲线有非常大的影响，入射角增大可能会使滤光片曲线蓝移，而圆锥角可能会使二向色镜的透过区减小。白的讲，以我对

共聚焦荧光显微镜 共聚焦荧光显微镜放大倍数

共聚焦荧光显微镜 共聚焦荧光显微镜放大倍数

荧光显微镜

的了解，只能对荧光强度定性，不能定量。因为调焦是人为控制的，手动调焦需要人的眼睛来判断焦距是否调的很好，而这是不可能实现在相同条件下的荧光记录和分析的，焦距的微小改变能够很大程度上影响荧光强度的变化。所以，这并非造，而是

实验设计

本身的特点所决定的。文献中的定量分析，个人认为需要有折扣的相信。

荧光定量

分析最准确的方法是

分析。

a、利用荧光标记特定的抗体，a错误；

b、可以将与染色体特异性结合的抗体用荧光标记，来跟踪染色体，进而观察活细胞有丝分裂过程中染色体的行为变化，b正确；

c、只有动物细胞能产生抗体，因此利用标记的抗体不能研究植物的光合作用过程，c错误；

d、利用标记的氨基酸分子可观察分泌性蛋白的合成和分泌过程，d错误．

故选：b．

用荧光显微镜看的东西能用激光共聚焦显微镜看么

NF—陷波滤光片notchfilter缩写。

也是一种

滤光片的选择

荧光显微镜

，如果用普通的荧光显微镜可以看，那么用

激光共聚焦显微镜

同样也可以看。

共聚焦显微技术的共聚焦显微镜实现方式

聚焦型：入射激发光聚焦在待测样品上；

目前共聚焦的实现有两种方式：激光共聚焦和数字共聚焦。 这种共聚焦技术利用激光 作为激发光源，将激光聚焦于样品中的某一点，这样只有该点附近的区域有荧光，其他没有被激发的部位没有荧光，这一区域发出的荧光反射到光电倍增管，在光电倍增管前设有1 个计算机控制的可调节针孔， 保证只有被激发点发出的荧光才能到达光电管，而附近其他点所发出的荧光被挡在视野之外。采用计算机控制激光和针孔， 对细胞内的某一层面进行扫描，可以获得清晰的二维图像。

了解滤光片的明敏规格能够使用户快速读懂各个滤光片厂家的产品，例如Olympus,Leica,Nikon,Zeiss,Sunny和Motic。

DNA与蛋白质相互作用的研究方法有哪些

lp/sp/bp—长通/短通/带通。

（1） 利用有色荧光蛋白标记技术进行蛋白定位研究

此法也可称为活细胞定位.把两种具有相互作用的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光

是相互作用的蛋白由于标上荧光蛋白,实际上是两个融合蛋白.融合蛋白的定位结果或共定位结果是否与天然蛋白分布一致,有待于进一步确定.而利用免疫荧光标记技术可以避免这一缺点.

（2） 利用双色或多色染色的免疫荧光技术进行蛋白定位研究

免疫荧光的原理是,首先把细胞进行固定,然后用待检测靶蛋白的抗体（一抗）与细胞内

靶蛋白进行免疫反应,再用荧光素（如 FITC 和 TRITC 等）标记的二抗与一抗进行反应.这样就在细胞内形成[Ca2+]=Kd[R-Rmin]/[Rmax-R]免疫复合物（靶蛋白----一抗---二抗）,结果靶蛋白被标上颜色,然后可用共聚焦荧光显微镜观测定位与共定位结果.

靶细胞进行转染表达目的蛋白,然后标记目的蛋白进行观测.免疫荧光技术的缺点是荧光相对较弱并且背景较高,结果受到干扰,所以这项技术不好掌握.为了结果的可靠性,要求严格设计阳性对照与阴性对照.

（3） 细胞内蛋白动态定位

有时细胞在正常状态下,有相互作用的蛋白在胞内可能暂时分开,没有共定位现象发生.

但是在某一个特定情况下,如细胞受到外界时,细胞本身会产生应急反应,这时暂时分离的蛋白有可能发生相互作用,并产生共定位现象.所以在进行共定位研究时,可根据具体情况具体分析,必要时观测细胞内蛋白动态定位结果.

细菌分泌性表达的GFP用荧光显微镜能看到吗?

）。

估计不行,除非你的蛋白集中分布,分泌到培养液里了,那就难说(3)免疫酶染色中的3%氢及2N盐酸是否还需要用?了,有可能有,有可能没有!

是用荧光共聚焦显微镜,更清晰.

我做过酵母和植物细胞原生质体的膜蛋白融合GFP荧光,都是在共聚焦荧光显微镜下看的

<细胞生物学>为什么荧光显微技术是目前光镜水平最有效的生物大分子定性定位工具

5、价格方面，由于硬件和软件功能上的成本，激光共聚焦显微镜价格高于普通倒置荧光显4、应用方向不同，激光共聚焦显微镜主要用于活细胞荧光、厚细胞层或细胞球、厚组织、体外培养的类器官等的清晰观察和成像，拍摄的图像常被用于分析。普通倒置荧光显微镜只适用于单层细胞、薄组织切片等较薄、背景信号较弱的观察和成像，拍摄的图像背景信号较高时不适应后期分析；微镜；

1. 在现有的光学成像条件下，直接观察生物大分子有很大难度，这主要受限于显微镜的分辨率，成像的对比度和信噪比等，二荧光标记可以极大提高信号的强度，且荧光分子与要观察的生物大分子具有特异性结合，可以进行有针对性的观察。

我的荧光免疫染色出了什么问题

你好，细胞生物学产品专家齐氏生物很高兴为您解答，以下是荧光免疫染色常见的5个问题：

1、问:用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白，两者作过程有哪些不同?

参考见解:只是固定方法不同。细胞固定用甲醇，切片固定用，而染色方法是一样的。

2、问:近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?

(2)我的做法是两种一抗（CHI抗体）同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰蛋白（绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白）的载体中,共转染到功能细胞中（一般选用 COS7 细胞）表达带有荧光的融合蛋白.这样,相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光,可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行细胞定位或共定位时,必须用共聚焦荧光显微镜观测.因为共聚焦荧光显微镜（相当于医院给病人诊断的 CT）观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色,就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象,无法确定蛋白质共定位现象.在进行定位或共定位同时,也可以对细胞核进行染色.这样,在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.上面介绍的活细胞定位,其优点是表达的荧光蛋白荧光强,没有背景,观测方便.但缺点。

(3)我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

(4)封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。

(5)其余步骤同一般免疫荧光单标作。

3、问:本人拟做Brdu标记神经干细胞免疫荧光，二抗为FITC标记，想请教各位大侠:

(1)抗体分装和荧光显微镜观察时是否一定要在暗室中进行?

(2)封片时是否用甘油缓冲液即可，还是用甘油和0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液等量混合封片?

参考见解:

(1)你的二抗是用FITC标记的，为避免荧光分解，分装及荧光显微镜观察时均要避光;

(2)封片用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，后者能使玻片透明;

(3)关于免疫酶染色，如果是用物酶做标记，就必须用3%H2O2以去除内源性物酶;2N盐酸需要使用，目的是使DNA变性，让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu结合。

4、问:做间接法免疫荧光染色，如何设置对LM-75金卤灯——仿汞灯光谱。照?

(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。

(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

5、问:我做乳腺组织的免疫荧光染色，结果用激光共聚焦显微镜看很好:有阳性信号，阴性对照组也没有荧光，但是拿到荧光显微镜下看，我的阴性对照组一片绿，像非特异性染色，到底哪个结果才是真实的呢?

参考见解:激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜要高的多，出现上述现象首先要排除荧光显微镜的问题，如是不是紫外灯泡寿命到期了或者别的原因，荧光显微镜没有问题，那就以共聚焦显微镜的结果为主。

希望能帮您答疑解惑！

请教如何预测一个蛋白是否和一个基因有相互作用

2. 共聚焦显微镜可以提高分辨率，这与荧光显微镜并不矛盾ZET—磁控溅射镀膜激发片，激光应用，通常0度角入射。，因为荧光技术可以与共聚焦显微技术结合，也就是共聚焦荧光显微镜。

科室小白，想请问一下，倒置荧光的显微镜和激光共聚焦的主要异在哪？

免疫荧光技术优点就是可用来检测细胞内源性蛋白的定位及相互作用.当然也可以对

主要区别如下：

1、按照物镜与载物台的相对位置，激光共聚焦显微镜有正置和倒置两种。

2、激光共聚焦显微镜使用激光作为光源，倒置荧光显微镜光参考见解:我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是:源多为金属卤素物、LED而不是激光；

3、激光共聚焦显微镜在相机之前有针孔或者狭缝，以达到过滤掉非焦平面光信号的目的。普通倒置荧光显微镜没有针孔或者狭缝去除非焦平面光信号，因此成像较激光共聚焦显微镜明显模糊；

倒置荧光显微镜与激光共聚焦显微镜有什么区别

3.自发荧光小

荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别

共聚焦

激光共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备（显示器、彩色打印机）等。通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样品进行断层扫描和成像。因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。

同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具.地对光谱的本质进行分析，区分发射光谱高度重叠的不同标记的信号。

最重要的是，对于多色的荧光染色，它能消除了荧光串色的影响，同时限度的减少了样品荧光信号的损失。这些都是一般光镜所不能达到的。

激光共聚焦能观察液体吗?

(2)阴性对照:标本直接滴加二抗，呈阴性反应。

能。根据查询相关资料信息显示，激光扫描共聚焦显微镜可以应用在血液病学和医学免疫学研究中，所以可以观察液体。激光扫描共聚焦显微镜（Con参考见解:是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。focallaserscanningmicroscope，简称CLSM）是近代生物医学图象仪器，是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针。