DNA聚合酶和连接酶有什么区别？请详细说明。

DNA连接酶用于基因工程，是在同一种限制酶（有时可能不是同一种，只要形成的末端是互补的就行）取出目基因和载体（一般为质粒）被切割后，将目的基因插入载体时，DNA连接酶将目的基因的末端（平末端或黏性末端）与载体被切割后形成的末端连接起来，注意是作用于两脱氧核糖核苷酸间的磷酸二脂键而不是作用于碱基之间的氢键。

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另外，DNA连接酶有很多种，分为两大类，一为利用ATP能量促使两个核苷酸链形成磷酸二酯键的ATP依赖性DNA连接酶。另一种是利用NAD+能量促使两个核苷酸链DNA聚合酶用于在DNA时形成新的子代DNA。形成磷酸二酯键的NAD+依赖性DNA连接酶。这两种酶又有很多同工酶。一般的连接酶所连接的两条链必须是与同一条互补链配对结合的，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。

而T4DNA聚合酶是用于DNA，由一条DNA单链为模版，在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则，游离的碱基合成另外一条单链，一起拼成DNA双链，这样原来的双链DNA分别分成了两个单链有各自合成了自己的互补单链，达到了的目的。DNA连接酶既可以连接黏性末端又可以连接平末端，但连接平末端的效率比较低。

这都是我才学的，只有一段是修改采纳别人的，希望对你有用。

t4pnk和t4连接酶别

1、T4PNK可以使用T4DNA连接（2）T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低.酶的buffer，而T4DNA连接酶不可以使用T4PNK的。

T4DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 RNA聚合酶 区别和需要他们的场所

①在宿主细胞中能保存下来并能大量；

DNA连接酶中含T42、T4DNA连接酶可以催化粘端或平端双链DNA，而T4PNK不可以。DNA连接酶，它们一般用于基因工程中目的基因与运载体之间的结合。

RNA聚合酶用于在转录过程中形成mRNA。

t4dna连接酶有哪些作用

另外VEC：INS的比例多换几种， 多尝试几次总会成功的， 你LIGATION成功了就可以继续了啊， 跟胶和PCR较什么劲。

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NADP水解提供的能量催特点不同。化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键

DNA连接酶的种类及区别?限制酶和DNA连接酶作用的化学键分别是什么?载体的条件是?（3点 ）

不知道你用的是哪种T4了， 我以上说的是PROMEGA的T4。 公司不一样效率也有所异是真的了。

（1）E·coli DNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端；

2.

DNA连接酶：连接DNA单链与DNA单链之间的磷酸二酯键

限制性内切酶：剪切双链DNA内的磷酸二酯键

3.

作为运载体必须具有三个条件：

③有一定的标记基因,便于进行筛选.如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛（3）热稳定的DNA连接酶（thermostableDNAligase）,是从嗜热高温放线菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分离纯化的,一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种酶.选的标记基因.一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建.现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的.

请问t4ligase的连接效率如何？我用酶切产物进行连接，看不见连接产物，也P不到

②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入；

。。。。。1.。

LIGATION的话链接成功了出菌落了就好啊， 没有必要一定要需要在胶上看见， 或者是要PCR能看见的。

因为本身链接本身所需要的VECTOR和INSERT的DNA量就很小。 如果能看见的话那需要大含量的LIGATION， 没有那个必要， 除非是你出现问题了。

可是即使是出现问题了， LIGATION技术本身的特点也注定不是肯定可以看得到产物的。 虽然我知道的确有人这么作。

T4 LIGATION总的来说还是不错的， 如果觉得不理想建议换几种链接方式， 比如16度O.N啊， 比如4度O.N啊， 比如室温3小时啊， 等等， 比较起来我觉得T4的LIGATION是相当好的了， 比快速的那种我个人经验要稳定， 如果短期不容易成功选ON的那种LIGATION方式。