如何增加荧光显微镜的曝光时间和频率

能够想到四个重要因素影响背景是亮还是暗（我的经验来自生物学的组织/细胞免疫荧光染色实验）：

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1. 光圈。光圈开得大，顾名思义所有光信号包括背景信号都会增强。

2. 曝光时间。光信号再强，你只选取其中很少一部分来成像，也能够控制图像中的信号强度。

3. 样品/玻片本身的自发荧光。

4. 样品的非特异性染色。

总体是一个所有检测手段通的问题，即信噪比，信号与噪声比率。

1，2对信噪比影响不大，在背景过强时很难通过调整1，2来解决问题。如果背景不存在过强问题，则通过1确保有用信号足够强，通过2减低曝光时间至背景充分黑暗即可。

3，4才是控制信噪比的关键因素。自发荧光无法完全避免，只能通过选取自发荧光较低的材料来控制，另外固定及染色过程中的一些试剂有可能影响样本的自发荧光。非特异性染色是更为常见的造成背景问题的原因，通过优化封闭条件，抗体/试剂用量，染色时长与温度等条件来调整。

倒置荧光显微镜的使用

倒置荧光显微镜作规程

二、 荧光观察

1． 打开荧光观察专用的汞灯光源，预热2～3分钟。

5． 取下样品，把物镜调至空档处，盖好物镜和目镜防尘盖。关上电源，盖上显微镜防尘罩。

拓展：倒置荧光显微镜，是指与一般显微镜相比，其物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，由荧光附件与显微镜有机结合构成的显微镜。

激发光从物镜向上落射到标本表面，被反射到物镜中并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，经双色束分离器使激发光和荧光分开而成像。

显微镜荧光强度和曝光时间的关系

显微镜荧光强度和曝光时间成正比。荧光显微镜是以紫外线为光源。用以照射被检物体。使之发出荧光。然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光强度越强。需要的曝光时间越长。二者成正比关系。

尼康荧光显微镜怎么作

步骤：

1.开机：

1.1.打间总电源开关

1.2.打开电脑电源开关

1.3.打开数码相机电源开关

1.4.打开显微镜电源开关（打开汞灯电源开关）

2.调试显微镜光路：

2.1.把载玻片放到载物台上。调节聚焦。

2..根据物镜指数乘0.8确定聚光镜光圈值，调整到位。

2.3.将视场光阑缩小，然后调节聚光镜高度，直到从目镜中观察到视场光阑的清晰成像。

2.4.放大视场光阑，使其在目镜中的黑框扩展到视野以外。

3.调试数码相机拍摄照片：

3.1.在显微镜取景器中对好视野及焦距。

3.2.打开photoshop程序。

3.3.点击“文件--自动–Kodakmds290acquine…。”调出相机控制窗口。

3.4.ZOOM定为77。拍摄格式为640480不要改变。

3.5.在相机控制窗口上点preview，观察预览图象的亮度。选择适当的曝光时间使预览的亮度合适。

3.6.点拍摄按纽拍摄，等待几秒钟后传回电脑并在photoshop窗口里显示。

3.7.继续拍摄下一张照片。

3..拍摄十来张照片后要及时保存照片。

3.9.先关闭相机控制按纽。并保存拍摄条件到默认值。

3.10.在photoshop中保存刚拍摄的照片到指定文件夹中，保存后要关闭照片。

3.11.保存并关闭全部照片后重新打开相机控制窗口继续拍摄。

3.12.拍摄全部完成后保存所拍摄的照片。需要时将照片通过网络上传到校园网上，不能使用U盘或软盘转移文件。或者将照片文件刻录到光盘上。

4.关机：

4.1.关闭显微镜电源。

4.2.关闭汞灯电源。

4.3.关闭数码相机电源。

4.4.关闭电脑时点“重新启动电脑”，待电脑进入关闭状态并重新启动时按电脑电源开关强制关机。注意不能直接点击“关闭电脑”。

4.5.关闭房间电源总开关。

免疫荧光怎么看曝光度

用荧光显微镜观察。

一般曝光时长是10到15s，这时候荧光弱，背景深，若加深荧光，就会有很多噪点。

荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1比20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。