FISH检测主要是检测什么

以用来对进行检测和定位。荧光标记的探针只和具有高度相似性的杂合，可用于染色体上基因的定位，或在分子生态学中用来标记不同分类细菌或古菌中的核糖体RNA。

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技术原理

荧光原位杂交技术的基本原理是如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的探针是同源互补的，二者经变性—退火—复性，即可形成靶DNA与探针的杂交体。

将探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

技术要点

1、FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色体，也可以是间期细胞。

2、生物素、、Dinitrophenyl （DNP）、Ami-noacetyl Fluorine（AAF）等均可用于探针标记。近年来，大片段的DNA探针（100-400 kb）已被研制出来，由于控针较长，故可将荧光物质直接标记在核苷酸上，使杂交过程进一步简化，而且杂交信号更强。

3、荧光原位杂交可以通过CCD（电荷耦合器件）相机系统或激光共聚焦扫描成像系统将摄取的信号存储在计算机中，经过软件特殊处理后显示在屏幕上。

使用数码成像相机系统或CCD相机系统，灰度图像被拍摄几次并存储在计算机中，接下来通过一些人造色，软件系统接收获得的示例图像，经过软件的综合处理，后以多色图像显示出来。此外，在G-带状染色体被75酒精或甲醇褪色后，FISH可以更清楚地识别易位。

医疗应用

通常，发育障碍儿童的父母希望在选择要另一个孩子之前更多地了解他们孩子的状况。这些问题可以通过分析父母和孩子的 DNA 来解决。在不了解儿童发育障碍的情况下，可以使用 FISH 和细胞遗传学技术潜在地确定其原因。

使用 FISH 诊断的疾病示例包括Prader-Willi 综合征、Angelman 综合征、22q13 缺失综合征、慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、Cri-du-chat、Velocardiofacial 综合征和唐氏综合症。

细胞FISH 适用于体细胞或减数分裂核型异常以及少症的男性，因为大约 50% 的少症男性的染色体异常率增加。对染色体 21、X 和 Y 的分析足以识别处于危险中的少症个体。

在医学上，FISH 可用于形成诊断、评估预后或评估疾病（如癌症）的缓解情况。然后可以专门定制治疗。由于细微的染色体特征，涉及中期染色体分析的传统检查通常无法识别区分一种疾病与另一种疾病的特征；FISH 可以阐明这些异。

以上内容参考

FISH是缩写，即fluorescence in situ hybridization (FISH) ，中文是“荧光原位杂交”，是一种病理诊断技术，可以用于检测乳腺癌组织中Her－2基因的表达。Her－2是乳腺癌分子靶向治疗的重要靶点，FISH检测Her－2表达阳性预示靶向治疗物治疗有效。

什么是荧光原位杂交（FISH）？

我们老师说叫做。可能是把要杂交的那段基因并不取出来，只是跟据它的基因顺序，在体外合成一种带荧光的蛋白基因。然后以象单克隆抗体的方式一样去和生物体内的基因杂交，合成可以发荧光的蛋白。通过荧光检测可以看到编码该蛋白的基因在什么位置。

荧光原位杂交与免疫荧光有什么区别

荧光原位杂交与免疫荧光区别：

荧光原位杂交

荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘制方法，使用荧光素标记探针，以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。

免疫荧光

荧光抗体法。是一种将抗原、抗体的结合反应与形态学相结合的方法。该法把血清学的特异性、荧光色素的敏感性、显微镜检查法集为一体，扩大了免疫学诊断的效果，是近代免疫学的一种重要研究手段。抗体球蛋白标记上荧光色素，即成为荧光抗体。

fish技术的杂交溶液是什么意思

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术。原位杂交是指将特定标记的已知顺序为探针与细胞或组织切片中进行杂交，从而对特定顺序进行定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

2021-10-09 miRNA 荧光原位杂交技术（FISH）

Author: Junfei Xie

Date: 09-10-2021

实蝇冰上麻醉，放入75%酒精中消毒3分钟，然后转入PBS清洗；

清洗干净的果蝇放入盛放Grace's Insect Medium培养皿中，小心解剖出需要的组织；

组织转移入4%PFA中，室温固定1h;

用800ul PBTT在室温通透化处理15min；

PBTT洗涤三次，每次5min；

PBS洗涤样品两次，每次5min;

用PBT：RNA杂交液=1：1，洗涤一次，然后样品储存在RNA杂交液中。

RNA杂交液煮沸5分钟，冰上骤冷5分钟；

样品加入杂交液中，56℃孵育2h;

探针用RNA杂交液稀释，比例1：50——1：2000；

加热探针80℃，5min，冰上骤冷5min；（对于短探针<50nt，无复杂二级结构则无需此步骤）

样本加入探针杂交液中，56℃杂交12h（短探针30nt-80nt，孵育时间30min-2h）

样品转移至DAPI染色液中孵育30min；

预热杂交液至56℃，洗涤样品3次，每次15min;

用PBT洗涤5min;

转移入PBS中洗涤5分钟；

避光保存的样品转移至体式荧光显微镜下，

在载玻片滴加一滴抗淬灭剂，样品放入淬灭剂，并解剖脂肪体至细小碎块，分散开来。

用盖玻片从一端慢慢下压，完全覆盖在样品上，切勿左右移动盖玻片。

吸取多余淬灭剂，并用指甲油封闭玻片四周，晾干避光保存。

：临用前加入

参考资料：

[1]刘冀珑. 果蝇组织荧光原位杂交[J]. Bio-101, 2019:1010301.

[2] Lecuyer E , Necakov A S , Caceres L , et al. High-resolution fluorescent in situ hybridization of Drosophila embryos and tissues.[J]. Csh Protoc, 2008, 2008(6):0-0.

[3] Nizami Z F , Liu J L , Gall J G . Fluorescent In Situ Hybridization of Nuclear Bodies in Drosophila melanogaster Ovaries[J]. Mods in Molecular Biology, 2015, 1328:137-149.

[4] Wilk R , Hu J , Krause H M . In Situ Hybridization: Fruit Fly Embryos and Tissues[J]. John Wiley & Sons, Inc. 2017.

原位杂交杂交液请教，是酵母tRNA还是酵母RNA

杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.经典的杂交方法是将DNA或RNA先转移并固定到纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针.经典的核算杂交方法主要包括：DNA印迹杂交（Southernblot）RNA印迹杂交(Northernblot)以及斑点杂交和原位杂交：1、DNA印迹杂交（DNAblothybridization）——有两种印迹法：将DNA或RNA溶液直接点样于纤维素膜或尼龙膜上（斑点或狭线印迹）经琼脂糖凝胶电泳将片段的DNA或RNA转移到膜上（Southern和Northern印迹法）.DNA在电泳前先用限制性内切酶消化.2、RNA印迹杂交（RNAblothybridization）：RNA印迹杂交是一种检测已固定在滤膜上的总RNA或mRNA特定靶序列的技术.3、斑点杂交将少量样品点样在纤维素滤膜上,80℃烘烤后可牢固地固定在膜上,再用探针进行杂交.尼龙膜,特别是聚（PVDF）与DNA结合力更高,坚韧、易作.点样可手工,也可用手工点样品.检测可用放射性探针自显影或非放射性探针显色.可用于DNA或RNA分析.4、原位杂交在保持细胞形态条件下,进行细胞内杂交,显影或显色.可用于DNA或RNA分析.荧光原位杂交（FISH）进行染色体DNA分析可用于生物学研究的许多领域以及临床细胞遗传学研究.其主要优点是不仅可以在细胞分裂的中期,而且可在分裂间期核中诊断染色体的变化.广义的杂交就是指非同源的分子间的复性（氢键结合）过程.因此可以说,目前的基因检测技术,除了质普法外都或多或少的涉及了杂交原理.如PCR的引物复性过程、基因芯片的杂交检测过程、基因测序的引物复性过程以及各种SNP检测方法等等.