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壳聚糖怎样还原成甲壳素

如果一定要做可以和乙酸做酰化，用EDC-NHS化学就可以，不过这样做成本其实挺高的，还是直接就买甲壳素实在一点。

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有害物质的可控范第六步，确定大来源于动物细胞的某一氧化还原酶在大肠杆菌的细胞和在原来表达它的动物细胞中的具体部位（原题没有说清楚，所以对两种细胞都要讨论）。 1.确定大肠杆菌表达的来源于动物细胞的某一氧化还原酶在大肠杆菌的细胞的具体部位。给予大肠杆菌细胞外界光源，使导入的荧光基团发出特异性波长的荧光， 用荧光显微镜直接观察荧光所在细胞的亚细胞部位，并拍照可确定大肠杆菌表达的来源于动物细胞的某一氧化还原酶在大肠杆菌的细胞的具体部位。 2.确定来源于动物细胞的某一氧化还原酶在原来表达它的动物细胞内的具体部位。按第五步构成融合蛋白质当然是可以的，但是等于把步的工作有对抗源于动 物细胞的某一氧化还原酶的基因基本上又重复了一遍，工作量大也没有太大必要。但是在氨基端共建连接上一段信号肽，用有机合成合成方法（比如用EDC催化氨 基与羧基缩水构成新的肽键，虽然副反应不少，但是反应条件温和，效率高，用层析分离收获到所需产品并不难，可是信号斑在肽段中间，再用有机合成先切开再插 入信号斑序列，然后还要连接，每一步都有副反应，每一步都要分离提纯，还涉及到重折叠，即使能够做成，劳动量比融合蛋白不小。 那怎么办？既然困难很大，那么就另辟蹊径，从别的实验途径达到目的。做好了有荧光染料标记的抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗体，不再加工了； 而转向加工原来表达“来源于动物细胞的某一氧化还原酶”的动物细胞本身·， 将该种动物细胞粉碎，然后分级分离提纯细胞不同成分，比如离心、层析，不用太多的分离纯化，对膜性封闭细胞器还是必须能够彼此分开，因为要加以各自粉碎， 膜性封闭细胞器混在一起被粉碎就不知道液相提取液的具体来源了。然后分别对于不同提取液加入有荧光染料标记的抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗 体，进行免疫沉淀。发生沉淀后收集免疫沉淀物，因为可以事先用非变性分子筛层析测出单抗与目的酶混合物的相对分子量，再给予不同提取液加入有荧光染料标记 的抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗与其抗原的复合物给予外界光源，使单抗偶联的荧光染料发出特定波长的荧光，进而用荧光显微镜观测，是阳性结 果的提取液是目地酶的来源的亚细胞处。如果免疫沉淀物中的荧光有机染料不能够有效吸收外界光源并且激发荧光，可以适当加入中性盐溶液，比如氯化钠，拆 解开免疫复合物，并适当稀释。因为有荧光显微镜的直接观测，所以免疫沉淀可以做的稍微比较粗糙。围，范围以内是食品级，范围以外是不能用。

能否抑制某一特地蛋白，基因敲除方法除外。

以我只是抛砖引玉，并不是说我的上面的实验设计方案就是的，更不是的。 提高实验设计能力，除了学习基本的实验原理和基础理论知识外，还要注意课本中的经典实验的基本设计方法，但是这是远远不够的，可能的话要看些实验指导书。 在自己有条件做实验时多动手多思考，而不是照猫画虎的临摹一遍；没有条件自己动手时可以仔细思考关键的实验总体过程，把大的问题逐渐分解为小的问题，再根 据掌握的知识去试图能够用一些实验手段对小的问题加以实验作性的解决，并且要考虑小的问题的解决是在解答大的问题过程中起到了什么具体的作用。阅读SCI原始论文是必要的，但是没有学好基本的基础理论知识和基本的实验原理，看多少论文都是用海市蜃楼来炒作房地产，比房地产泡沫还玄虚。仅仅熟悉教 材上的经典实验设计没用！--------我没有让谁完全不去看经典实验！实验技术早就超越了教材上的经典实验的时代，不接触一些现代实验技术，没有可能 提高实验设计能力-----------无论在中，还是在科研工作中。1升溶液中所含溶质的摩尔数

刚要下线，看到你这贴，就说几句了。

能否抑制某一特地蛋白，基因敲除方法除外，当然knock in也就不说了，本质一样。siRNA,miRNA引起的基因沉默，有成型的protocols。siRNA可以通过降解mRNA和引起DNA的甲基化（招来一些DNA甲基化酶），还可以引起染色质大片段的异染色质化导致基因沉默。miRNA一般是在mRNA的5’末端，有时也在mRNA的3’末端形成空间位阻导致基因沉默。当然siRNA,miRNA引起的基因沉默，肯定不是。另外还可以通过对于蛋白质的结构改变而使得其功能丧失，常用的一个办法，利用目的蛋白免疫小鼠后获得单抗（具体实验步骤省略），然后用显微注射入细胞类让其与目的蛋白质发生免疫反应，抑制目的蛋白质的功能。还有：通过对目的蛋白质加以点突变，改变其折叠状态，以影响其生物功能。

下面举个例子，是我回答别人的一个具1.2.4人工抗原的质量评定体的实验课题（研究某蛋白质的功能）的全程设计，可以参考。

与在细胞中的（实验设计方案与讨论）

题目：用大肠杆菌表达来源于动物细胞的某一氧化还原酶；并利用免疫荧光技术对细胞中的该蛋白进行。答：这问题由我本人设计实验（方法还有很多种，我没有都写出来），但不是我的实验课题，是我在2012年的一天的晚上在“百度知道”（偶尔去了一趟） 回答内蒙古大学某人的一个实验设计问题，可我刚回答完，原问题就被撤消了（⊙﹏⊙b汗）。不是的（疏漏之处欢迎斧正）。

这不难设计。 步，获得来源于动物细胞的某一氧化还原酶的基因并且将其导入大肠杆菌。这就是分离基因，化学合成，cDNA文库，mRNA筛选（比如DDRT，RDA，mRNA异显示技术,削减杂交等），鸟枪法分离基因等等；然后导入载体 （质粒，用表达载体好一些，因为先把载体DNA整合到大肠杆菌的基因组不太容易，整合进去高表达还要费不少事情）；再将载体导入大肠杆菌细胞（比如氯化钙 制备感受态大肠杆菌，使其转化载体进入其细胞），一般在其基因之前加上强启动子。这步还包括阳性克隆筛选和分离，大规模培养，产品收获就算了，不要粉碎细 菌，也不要构成分泌蛋白质，就让目的基因表达的蛋白质留在大肠杆菌细胞里。这一步就是完全依据基因工程的进本步骤而设计。 第二步，获得抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗体。单抗的制备方法，粗糙的方法：小鼠腹水法。其实用多克隆抗体也可以，只是效果一些。 第三步，给单克隆抗体标记上可以发出荧光的基团。荧光从哪来？给偶连蛋白质标记上能够发出荧光的有机染料分子不就行了。或者也可以直接使用量子点荧光 法，量子点本身也就是靠其偶联的抗体在细胞内的。量子点制备与实验方法的原理与步骤可以参见Mods in Molecular Biology Vol-374-Quantum Dots。这一步也下一步密切信关，做得好下一步可以省很多事情。当然也可以给把单克隆抗体的基因偶联上绿色荧光蛋白的基因在大肠杆菌中一同表达，两者之 间共价键链接，但是比较麻烦。 第四步，将用免疫荧光基团标记的抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗体进入大肠杆菌细胞中。给把单克隆抗体的基因偶联上绿色荧光蛋白的基因在大肠杆菌中一同表达，两者之间共价键链接，首先还要要把抗一种将抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克 隆抗体的基因分离出来导入大肠杆菌这也是一种实验方法，不过构建基因，联入DNA载体，导入细胞，阳性克隆筛选，工作量可不小，我是不这样实验的，时效比 太低。还有其他的更简单的实验方法：直接从蛋白质水平动手。从外界导入带有荧光标记的抗来源于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗体蛋白质，这又可以有好多种办 法：一种显微注射法，对实验人员的作水平要求推高，而劳动量大，像我这样的懒人不干（给钱也不干）；第二种方法让细胞内吞摄入蛋白质，然后把抗来源 于动物细胞的某一氧化还原酶的单克隆抗体一起拉入细胞（去查一下大肠杆菌内吞哪些蛋白质），当然要把大肠杆菌内吞蛋白质与抗来源于动物细胞的某一氧化还原 酶的单克隆抗体共价链接在一起。怎么连？再做个融合蛋白的基因去表达出来？那多累呀，像我这样的懒人不干（给钱也不干），谁像这样实验谁就去做，反正 我拒绝如此实验（不当低水平劳动力），可用分子交联方法-------用有机试剂把两者用化学反应偶联到一起不就行了吗，有空间位阻，加个链接臂行了 吧，比如可以先用EDC、等试试看，去查一下与抗体工程和酶的固定化相关的Mods inMolecular Biology ，Mods in Enzymology系列的实验手册。分子交联方法当然会出很多，用层析筛选一下，在检测一下活性，适当控制和调整反应试剂和反应条件，得到阳性 结果不难。荧光从哪来？给偶连蛋白质标记上能够发出荧光的有机染料分子不就行了。或者也可以直接使用量子点荧光法，量子点本身也就是靠其偶联的抗体在细胞 内的。量子点制备与实验方法的原理与步骤可以参见Mods in Molecular Biology Vol-374-Quantum Dots。第三步和第四步实际上很难说谁先谁后，我是为了说明清楚人为分开的。 第五步，单抗与来源于动物细胞的某一氧化还原酶（抗原）相互作用。抗原与抗体相互作用并不困难，但是在细胞中要注意必须使得两者在同一个亚细胞区室中。因为这题是在大肠杆菌中，没有细胞器，也就不必再给当克隆抗体连接上 进入各个封闭性的细胞器的信号肽序列，比如进入线粒体或者叶绿体或溶酶体等特异性信号肽序列。如果原问题问的是确定大肠杆菌表达的来源于动物细胞的某一氧 化还原酶在大肠杆菌的细胞的具体部位，那么这步实际上就省略了；如果原问题问的是确定大肠杆菌表达的来源于动物细胞的某一氧化还原酶在原来表达它的动物细 胞中的具体部位，那么给单抗的氨基端接上信号肽或者信号斑（后者不在氨基端）可能就是需要的（第六步再解释为什么即使对于真核的动物细胞也不是必须要给单 抗接上信号肽和信号斑）。给单抗接上信号肽和信号斑用融合蛋白当然是可行的，但是工作量又大了，有没有更爽的试验方法？当然有！请看第六步，

实际上，还有很多种实验方法，有很多实验方法不必使用免疫荧光，可能还更加简单。Good Luck!

合成免疫原的过程中，为什么需要活化羧基？蛋白质自身交联不需要活化吧？

1.2.2.2含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联

我曾经做过小分子和蛋白质的偶联，有一些自己总结的综述，你可以参考以下：

化学反应中，反应物总能量大于生成物总能量的反应副反应多, 高温氯化 9.5.2 乙烯氧氯化制

人工抗原合成常用的载体

常用来作为合工抗原的载体蛋白质有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。这些蛋白质分子中的α和ε-氨基（等电点8和10）、基、巯基（等电点为9）、咪唑基（等电点为7）、羧基（等电点2～4，大部分来自天冬氨酸或谷氨酸的β-和γ-羧基）等在等电点pH条件下，一部分成为质子，另一部分未质子化的亲核基团则具有反应活性，可与半抗原中的对应基团结合。当然，这些基团的反应性也取决于蛋白质各种氨基酸残基的微环境。牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HAS）分子中含有大量的赖氨酸，故有许多自由氨基存在，且在不同pH和离子强度下能保持较大的溶解度。此外，这些蛋白质在用（如吡啶、）溶解时，其活性基团仍呈可溶状态，因此，这两种蛋白质是常用的载体蛋白质[30]。近年来，有研究用人工合成的多聚肽(常用的是多聚赖氨酸)作载体，表现出能增加半抗原的免疫原性，从而使产生征对半抗原的特异性抗体可能性增加，被广泛应用[31，32]。

1.2.2人工抗原合成方法

2）碳二亚胺法（CDI）：碳二亚胺(EDC)使羟基和氨基间脱水形成酰胺键，半抗原上的羧基先与EDC反应生成一个中间物，然后再与蛋白质上的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物（见图1.5）。EDC被称作零长度交联剂之一，因为它作为酰胺键的形成介质并没有形成手臂分子。

此连接方法十分简便，只需将载体蛋白质和抗原按一定比例混合在适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1～2h，置室温24h，再经透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通过某些化学反应引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法进行偶联。

2）重氮化法：用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO2和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物（见图1.6）。

1.3.2.3含羟基半抗原的偶联

1）琥珀酸酐法：半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯(带有羧基的中间体)，再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基（图1.7）。

2）羰基二咪唑法：N，N’-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，在肽合成中首次表明了是形成极好的酰胺键试剂[33]。含羟基的分子同羰基二咪唑反应，形成中间体咪唑基甲酸酯，它能和N-亲核试剂反应，得到N-烷基化的甲酸酯键，通常蛋白质通过N-端(α-氨基)和赖氨酸侧链的(ε-氨基)和分子形成不带电的类似尿烷的衍生物，具有极好的化学稳定性。

人工抗原免疫原性的好坏，与多种因素有关。对不同的物质，影响免疫原性的因素并不完全相同，常常需要在得到抗体后对免疫偶合物的具体合成方法进行重新调整。但总的说来，影响人工抗原质量的因素主要有：

偶联比过去人们认为，联接到蛋白质分子上的半抗原数目要尽可能多。但实验证明，过多的半抗原并不能得到预期的结果，这是因为载体上覆盖的半抗原分子过多时，可能不利于载体与淋巴细胞表面结合，不能使载体引起免疫反应。实际上，每个载体分子连接上一个半抗原分子就足以产生抗体。有人认为，以BSA为例，连接到蛋白分子上的半抗原数以5～20为宜。而荣康泰等用不同的载体制备的人工抗原时，却发现各种载体的分子量不论是否接近，结合比都不尽相同，并建议为了取得免疫效果，应逐个确定各种载体的结合比。

有研究者认为，一定长度的手臂的介入，有助于半抗原暴露在外面，利于所产生抗体专一性的增强，如吴颂如等［34］发现，通常愈远离载体蛋白的基团，其特征反应愈明显。但也有一些研究者发现，手臂结构对免疫检测经常有不利的影响，有时产生的抗体对手臂结构亲和力特别强，对待测小分子亲和力却很弱，因此造成对特异性抗体检测的干扰。Sionf等［35］认为可以采取两种方法来避免因偶联桥而造成的不足：一是半抗原上相同位点结合蛋白质，但免疫原和包被抗原用不同的偶联桥；二是免疫原和包被抗原用相同的偶联桥，但与不同半抗原位点结合。Frieia［36］研究农酶免疫分析多年，他认为的偶联桥是3～6个直链的碳原子结构。

用来作半抗原的分子有分支结构，直链分子难以产生抗体。此外，有些抗生素(antibiotic)或农有多个可供蛋白质偶联的位点，但据研究，不同位点与蛋白质结合制备的人工抗原产生的抗体效价及亲合力都有别，这可能是因为不同位点结合导致半抗原呈现的空间结构不一样的原因。如合成灭草松和吡虫啉人工抗原时，当利用半抗原不同位点与载体结合时产生的抗体效价和亲合力明显不一样[37、38]。因此，如果一个分子内有多个不同的结合位点时，尽可能利用不同位点都合成出人工抗原，然后，通过比较，筛选出的人工抗原用于制备抗体作为检测。

1.2.4.1浓度测定

半抗原与载体分子反应后是否真正的连接在一起，如果发生连接，它们的连接基团又在哪里。这些问题可以通过吸收光谱图或质谱分析得到解决。

利用吸附与分配层析和电泳技术可鉴定人工抗原的偶联的纯度。前者适应范围广，但鉴别的灵敏度较低。后者是用于大分子大分子酶标记物和某些半抗原偶联物的纯度鉴定。如果电泳图谱上只出现一条电泳带，则表明人工抗原达到电泳纯，否则说明人工抗原中含有有利的未偶联的物质。

1.2.4.3偶联比的测定

1）分光光度法

根据赵肃清等人的说法［39］，如果半抗原的紫外吸收大于220nm(蛋白质在220nm以下会产生肽的强紫外吸收，如果半抗原的紫外吸收少于220nm，则与蛋白质肽的吸收发生重叠)，则可根据蛋白质及其半抗原特定的吸收峰的光密度值和各自的摩尔消光系数，计算出结合到每个蛋白质分子上的半抗原分子数（可以参考文献[30]中的279-283页计算）。

2）标记抗原示踪法

汽车edc是什么意思？

1.2.2.1分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶联

汽车edc是指高压电子燃油喷射系统edc故障灯亮就是指汽车发动机电控系统出现故障需要去修理厂维修。edc的作用是对喷油系统进行电子控制实现对喷油量以及喷油定时随运行工况的实时控制。以下关于汽车发动机介绍：汽车发动机是为汽车提供动力的装置决定着汽车的动力性、经济性、稳定性和环保性。汽车发动机分为柴油发动机、汽油发动机、电动汽车电动机和混合动力电动机其中汽油发动机和柴油发动机都属于往复活塞式内燃机将燃料的化学能转化为活塞运动的机械能对外输出动力。

催化2) 偶联桥氧化

做酰胺化反应，在反应前用EDC和NHS活化羧基时，如果被活化的小分子同时含有羧基和氨基那个会自我反应吗?

edc是什么意思？接下来一起来了解一下吧。

羧基（carboxyl）是有机化学中的基本化学基，所有的有机酸物质都可以叫羧酸，由一个碳原子、两个氧原子和一个氢原子组成，化学式-COOH。如醋酸（CH3-COOH）、氨基酸都含有羧基，这些羧基与烃基直接连接的化合物，叫作羧酸。

1.NHS的特点：2.3影响人工抗原质量的因素

会发生分子间反应的

超导edc要不要酸洗

其中重要的指标： EDC()含量，直接关系到人的生命健康，因为 EDC 被证明是致癌类化合物。并且精馏EDC以可逆反应为前提建立是挥发性物质，极易脱离树脂表面进入饮用水中。因此饮用水树脂生产过程是不能使用EDC的。

跃进小福星s50紫油版，云内发动机。EDC灯亮不闪烁。怎么回事。EDC灯亮动力下降怎么办？

催化

发动机——是将某一种形式的能量转换为机械能的机器。其功用是将液体或气体的化学能通过燃烧后转化为热能，再把热能通过膨胀转化为机械能并对外输出动力。汽车的动力来自发动机。发动机是汽车的心，为汽车的行走提供动力，汽车的动力性、经济性、环保性。简单讲发动机就是一个能量转换机构，即将汽油(柴油)的热能，通过在密封汽缸内燃烧气体膨胀时，推动活塞作功，转变为机械能，这是发动机基本原理。发动机所有结构都是为能量转换服务的，虽然发动机伴随着汽车走过了100多年的历史，无论是在设计上、制造上、工艺上还是在性能上、控制上都有很大的提高，其基本原理仍然未变，这是一个富于创造的时代，那些发动机设计者们，不断地将科技与发动机融为一体，把发动机变成一个复杂的机电一体化产品，使发动机性能达到近乎完善的程度，各世界汽车厂商也将发动机的性能作为竞争亮点，

酸性气体

一、汽车发动机的作用

二、汽车发动机的分类

1、按进气系统的工作方式可分为自然吸气、涡轮增压、机械增压和双增压四个类型。

2、按活塞运动方式可分为往复活塞式内燃机和旋转活塞式发动机两种。

4、按气缸数目不同可以分为单缸发动机和多缸1）混合酸酐法（mixed anhydride mod）：也称法。半抗原上的羧基在存在下与反应，形成混合酸酐的中间体，再与蛋白质的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物发动机。现代汽车多采用三缸，四缸、六缸、八缸发动机。

6、按冲程数可分为四冲程内燃机和二冲程内燃机。汽车发动机广泛使用四冲程内燃机。

7、按燃油供应方式分类：化油器发动机和电喷发动机以及缸内直喷发动机。

望采纳

羧基活化几小时

载体表面应首先应具有化学活性基团，这些基团可以直接与抗生素(antibioti我做的α-聚谷氨酸，其在（TFA）、DMSO中都溶解，但DMSO中这种聚氨基酸有螺旋的二级结构，所以DMSO-6D中的核磁峰型，需要加一点TFA-D。γ-聚谷氨酸在水中溶解液是要碱性水吧？这时候羧基是电离状态，估计难发生酯化或酰胺化。你得到的”不溶于水的产物“可能根本就是聚谷氨酸。因为加入的EDC和L-苯都是，盐酸将NaHCO3中和后，体系pH下降，导致聚谷氨酸沉淀。如果接枝率要求不高的话，可尝试DMSO-水的混合溶剂法。 查看原帖>>c)或农分子偶联，这是化学偶联制备抗原的前提；其次，载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子；载体还应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能；而且载体应具有足够的稳定性，且应在过程中吸收热量的化学反应该是廉价易得的。

羧基活化2小时至24小时。因为羧基活化中的EDC，NHS浓度一样，所以是在2小时至24小时。羧基化作用，英文名称为carboxylation，是指在有机化合物分子引入羧基的反应。包括有机化学上的羧基化作用，生物化学上的羧基化作用，羧基化作用是蛋白质翻译后修饰中重要的反应。

γ-PGA中的-COOH能否在水中和-NH2发生酰胺反应？

1) 偶联比

如果一个是溶解在水中，而-NH2是溶解在有1.2.4.2纯度鉴定和结构分析机溶剂中，那么会在两相界面发生酰胺化反应。 查看原帖>>

动物细胞的一种氧化还原酶在大肠杆菌中的表达