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1、楼上的Tm值可不是退火温度噢应该是primer的值，只是我们平常做PCR的时候可以通过Tm值推算退火温度罢了 呵呵概念是概念，生物学需要实践，很多的引物Tm值都可能达到70、80，甚至90，难道你准备PCR的时候用这种温度退火？ 再说了，引物的Tm值高了，不是说提高退火温度就能P得出来。

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2、Tm值高代表GC含量高，特异性就不好，所以才衍生了Touchdown和Slowdown的方法。

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3、 贴的是我随便找的张引物订单，是一条引物的，有两个Tm值是不同Na浓度的。

4、还有不同引物的碱基序列不同，所以Tm不一样。

5、当然也有可能恰好是相同的，那是碱基算出来的Tm值恰好相等罢了。

6、 别把无知当学问了，Primerbank里随便拎条定量引物出来Tm值都能很高，难道你跑定量也用两步PCR，还有你那两步PCR的方法都是哪个年代的技术了，P一次就能P出来的东西非得弄得那么复杂，你觉得做科研的人都很闲？拜托多学习学习国外先进技术，没事看看JoVE和NatureProtocol吧。

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