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荧光定量pcrct值是什么意思(荧光定量pcr的ct值偏高)


1、Ct值：是指QPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的扩增循环数（cycle threshold）；也可以理解为起始模板扩增达到一定产无量时所对应的循环数；是荧光定量PCR最重要的结果呈现形式，用于基因表达量异或基因拷贝数的结果计算。

2、另外，观察复孔Ct的变化，可以看你当时加样时的误大小，一般情况下，复孔Ct值的值不超过0.05，不然表明误结果太大，结果不可信。

3、PCR早期，扩增处于理想情况下，循环数较少，产物积累少，产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显的区别；之后荧光的产生增加进入指数期，可在PCR反应刚处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量，以此作为“一定产物量”，并由此来推断模板最初的含量。

4、qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现，即扩增曲线。

5、一定产物量对应的荧光信号强度称为荧光阈值。

6、Ct值的重现性：PCR循环到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期，此时微小的误尚未放大，因此Ct值是具有一定的重现性的；同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。

7、Ct值的范围一般为15-35，Ct值过小，认为扩增在基线范围内，未达到荧光阈值；Ct值大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，无意义，可能该基因在该样本中无表达。

8、Ct值过大的原因1、模板浓度低（可提高模板浓度，降低RNA或cDNA的稀释倍数；或重新制备样品）2、扩增效率低（更换扩增方法；优化体系；更换试剂如引物等）Ct值过小的原因1、模板浓度高（减少模板cDNA的用量，稀释cDNA）2、引物设计不合适。

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