我在做微生物抑菌圈的实验，是芽孢杆菌的发酵液抑制白色念珠菌的生长，铺好平板后培养一天，可以吗？

②底部培养基未铺平，使牛津杯中的溶液流出

应该是48H没问题θ=D·antilog（IV/W）式中：就估计得重新做了！

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2010版典将霉菌真菌的培养时间改为5天。

抑菌实验中在接有某种菌的培养基中加含一种抑菌成分的滤纸片测其抑菌圈的直径

h，量取各抑菌圈直径（SH、SL、UH首先应该做细菌纯培养，如果是搞临床的，可以取适量粉末，放上去。观察抑菌圈的大小。物的敏感程度，应该和超出治疗量的大小没关系。、UL），以毫米为单位，误不超过0.1mm。

抗生素效价的管碟法（二剂量）测定抗生素的效价

白念培养48小时，还有就是在查一下芽孢杆菌发酵液有没有抑制白色念珠菌的生长的作用

抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法（cylinder

求出Pr

plate

mod）。管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.lmm，外径8.0±0.lmm，高10±0.lmm），管内放入标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，抗生素扩散的有效范围内则产生透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈（图实验-18）。抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。抗生素效价常采用二剂量法。将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入检品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。

求出W和V：

(2)

W=（SH+UH）-（SL+UL）

(3)

UL：供试品低剂量之抑菌圈直径

SH：标准品高剂量之抑菌圈直径

SL：标准品低剂量之抑菌圈直径

求出θ：（2）

θ：供试品和标准品的效价比

D：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1

I：高低剂量之比的对数，即log2或log4。

：(5)

Pr

Pr：供试品实际单位数

（2）培养基：效价检定用培养基（上层、底层）。

（3）抗生素：抗生素检品及标准品（高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1）。

（4）试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，牛津杯，无菌吸管，镊子，滴管，直尺。

（1）取无菌平皿，加入20ml底层培养基，凝固后作为底层。

（2）用灭菌生理盐水将短小芽胞杆菌的芽胞悬液稀释至一定浓度以能得到清晰的抑菌圈，且标准品高浓度所得抑菌圈直径在18~22mm为基准。用无菌吸管吸取1ml芽胞悬液，加入到200ml恒温于50℃的上层培养基中摇匀，迅速以无菌吸管吸取5ml，注入到底层培养基上，铺平待凝。

（3）在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL”

（4）镊子火焰灭菌3次，然后夹取4个牛津杯垂直放置在平板中标志附近（注：勿使钢管陷入培养基内，各小杯之间尽量等距）。

（5）以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外，且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。

（7）计算抗生素效价

（8）查放线图计算抗生素效价

双碟中出现破圈或抑菌圈不完整的原因

V=（UH+UL）-（SH+SL）

③放置牛津杯时使其移动、摩擦底部已凝固的培养基

④滴加溶液时不小心滴加到牛津1、污染：在实验作中，可能会发生污染现象，导致阴性对照样本受到了微生物污染，从而产生了抑菌圈。杯外

链霉素对葡萄球菌的抑菌圈直径大于大肠埃希菌的原因

（6）将平皿置于37℃恒温培养箱培养16~18

链霉素虽然对革兰氏阴性菌的杀菌作用大于阳性菌，但革兰氏阴性菌极主要有2种方法：简单的是密集划线法，用取菌环去了细菌后在琼脂表面反复密集划线直至布满平板；再就是涂布法，将细菌用液体培养基或生理盐水稀释到一定浓度，取一定体积的滴于培养基表面，用L形的玻璃棒或无菌棉拭子均匀涂布于培养基表面，稍事干燥后贴片。后者由于接种量固定、涂布均匀，效果比前者好。易对链霉素产生耐性，因此，有可能在你做的物敏感试验中该大肠埃希菌对链霉素耐，而葡萄球菌则更敏感一些。

牛津杯法原理

(1)

将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿15ml（下层），待其凝固。此外，将融化的PDA培养基冷却到50℃左右混入试验菌，将混有菌的培养基5 ml加到已凝固的培养基上待凝固（上层）。

以无菌作在培养基表面直接垂直放上牛津杯（内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，在杯中加入待检样品（发酵液），牛津杯一般可以装240微升,在放置牛津杯、加注品的时候要小心，以免物渗漏，将试验平板移动至培养箱的过程中要避免牛津杯的打翻。加满后培养基正面向上置37℃培养16-18小时，观察结果，抑菌圈用尺直接量就可以。在培养中,一方面试验菌开始生长，另一方面抗生素呈①牛津杯过满，溢出球面扩散，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小，有一条抑菌浓度带，在带范围内，菌不能生长，而呈透明的圆圈，这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高，抑菌圈越大。

为啥在实验作中阴性对照也会产生抑菌圈

UH：供试品高剂量之抑菌圈直径

由于受到污染或实验条件问题。

2、实验条件问题：在实验作中，实抑菌株本身就很少，抑真菌的更少。李红娟的“抗真菌乳酸菌的筛选及特性研究”中，用的指示菌是自行筛选的，确定最适培养温度为37℃。文中对抑菌圈大小没说明，只是说的有10mm以上（牛津杯直径6mm）。她把乳酸菌培养48小时后，提取上清液，测的抑菌活性，没说什么时候测的抑菌圈。本人也是刚开始做抑霉菌实验，若有兴趣，欢迎交流！学识有限，不足之处，望谅！谢谢！验条件可能存在问题，如温度、湿度、气氛等不符合要求，也可能导致阴性对照样本产生抑菌圈。

求大肠杆菌抑菌圈实验方法

=Ar×θ

很多种溶液配不成，你可以配成乳浊液。方法

抑菌圈实验做到什么程度算成功？

（1）细菌：短小芽胞杆菌[CMCC（B）63202]的芽和“UH”、“UL”标记。胞悬液。

我不是生物的，但要做抑菌实验，我不知道这个是不是抑菌圈，我很急，求大神指点，万分感谢

式中：

我也不是生物的，但是实验是做生物的，想请问一下你像我现在也要做抑菌实验 ，那我要先接种指示菌让它长满整个培养基才能用来做抑菌 ，那我要什么做才能让指示菌长满培Ar：供试品标示量或估计单位养基呢？