pcr反应原理 PCR反应原理秒懂百科

巢式PCR的原理

PCR原理〕

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DNA的半保留是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

pcr原理是什么?

PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

PCR有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。扩展资料

标准的PCR过程分为三步：

1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。

2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。

有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是也能在很短的时间内完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。

PCR技术的原理是什么

PCR技术的原理是依赖于与靶序列的寡核苷酸引物。PCR技术其实是一种体外的DNA产生扩增的技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将需要被扩增的DNA的片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经过一系列反应的多次循环，从而就可以在较短的时间内获得我们所需的特定的基因片段。

Pcr技术具有特异性强、灵敏度高、简便快速、纯度要求低等特点。PCR产物的生成量是以指数方式增加的，PCR的灵敏度可达3个RFU；在细菌学中小检出率为3个细菌。PCR反应用耐高温的聚合酶，一般在2-4小时就可以完成扩增反应。而且不需要分离或者是细菌及培养细胞等过程，DNA的粗制品以及RNA均可以作为扩增的模板。而且可直接用临床的标本如血液、洗嗽液、毛发、活组织等DNA的扩增检测。